酶联免疫检测试剂盒

　　酶联免疫检测试剂盒原理:

　　采用双抗体夹心法测定人雄激素结合蛋白（ABP）水平。用纯化的人雄激素结合蛋白（ABP）抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入 HRP 标记的 ABP 抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。颜色的深浅和样品中的 ABP含量呈正相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度（OD 值），根据标准曲线，计算测试样品中 ABP 浓度。

　　实验材料与试剂配制：

　　1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。

　　2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。

　　混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。

　　3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。

　　样品收集、处理及保存

　　1. 细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。

　　2. 细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104

　　-106

　　/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或

　　者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。

　　3. 血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。

　　4. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上

　　清。

　　5. 体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。

　　酶联免疫检测试剂盒

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